時(shí)間：2023-09-26 15:10:16
緒論：在尋找寫作靈感嗎？愛(ài)發(fā)表網(wǎng)為您精選了8篇醫(yī)藥行業(yè)定義，愿這些內(nèi)容能夠啟迪您的思維，激發(fā)您的創(chuàng)作熱情，歡迎您的閱讀與分享！
曾被中國(guó)企業(yè)備受推崇的蒙牛就是企業(yè)文化因知行不合一而導(dǎo)致滑落的一個(gè)典型案例。而一度被譽(yù)為中國(guó)企業(yè)家教父之一的牛根生也因沒(méi)有踐行企業(yè)文化中的商業(yè)倫理而備受人們非議?！ 懊刻煲唤锬蹋瑥?qiáng)壯中國(guó)人”、“中國(guó)航天員專用牛奶”，“蒙?！北怀晒Υ蛟斐梢粋€(gè)中國(guó)馳名商標(biāo)?！鞍倌昝膳?，強(qiáng)乳興農(nóng)”、“小勝憑智，大勝靠德”，這些蒙牛所謂的企業(yè)文化曾在中國(guó)被廣泛報(bào)道。牛根生與他創(chuàng)造的蒙牛品牌，從草原走向了大江南北，而牛根生本人也被成功打造成一個(gè)民族企業(yè)家的形象。 更多有關(guān)愛(ài)維龍媒董事長(zhǎng)段俊平先生中國(guó)化管理相關(guān)觀點(diǎn)可以參見(jiàn)《中國(guó)企業(yè)文化建設(shè)必須走中國(guó)化道路》
2006年8月8日，中國(guó)改革開放25年以來(lái)最隆重的品牌評(píng)選活動(dòng)在北京人民大會(huì)堂三樓金色大廳隆重揭曉。蒙牛、海爾、聯(lián)想等企業(yè)獲得“中國(guó)25大典范品牌企業(yè)”大獎(jiǎng)，蒙牛集團(tuán)董事長(zhǎng)牛根生與張瑞敏、柳傳志等人獲得“中國(guó)25大功勛品牌人物”大獎(jiǎng)。然而三鹿毒奶粉事件爆光后，在隨之公布的經(jīng)檢測(cè)確認(rèn)生產(chǎn)毒奶粉的廠商名單中，幾乎所有國(guó)內(nèi)處于前列的大企、名企如伊利、蒙牛、圣元等都榜上有名。受此影響，蒙牛的股價(jià)嚴(yán)重縮水，市值從300多億元縮減到了120多億元。三鹿三聚氰胺事件的有關(guān)犯罪人員剛剛被判決，三鹿企業(yè)還未被宣布破產(chǎn)，蒙牛特侖蘇OMP事件又爆發(fā)了。
“特侖蘇”一詞源自蒙語(yǔ)，是“金牌牛奶”之意。和普通牛奶相比，特侖蘇的定位是高端市場(chǎng)，它的最大賣點(diǎn)是添加了OMP，包裝上印有“中國(guó)公眾營(yíng)養(yǎng)與發(fā)展中心委托國(guó)家有關(guān)權(quán)威專業(yè)機(jī)構(gòu)對(duì)特侖蘇所含蛋白的實(shí)際效果進(jìn)行了動(dòng)物和人體的臨床實(shí)驗(yàn)”，實(shí)驗(yàn)證明“OMP在增加骨骼密度，防止骨量丟失方面具有作用”。然而特侖蘇在吸引了很多消費(fèi)者的同時(shí)，門前是非也一直不少。有些專家質(zhì)疑蒙牛生產(chǎn)的這種價(jià)格為普通牛奶2倍多的高端牛奶制品之所以賣得這么貴，是因?yàn)槌醋鞲拍睿矣泻艽蟮慕】碉L(fēng)險(xiǎn)。隨后專家調(diào)查OMP的來(lái)源、生產(chǎn)工藝、添加量、檢驗(yàn)報(bào)告以及國(guó)際同類產(chǎn)品政府許可和國(guó)外使用情況，認(rèn)為消費(fèi)者飲用目前市場(chǎng)上該產(chǎn)品沒(méi)有健康危害。但OMP不是我國(guó)現(xiàn)行國(guó)家衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)允許使用的食品原料，蒙牛公司進(jìn)口并使用OMP沒(méi)有事先申請(qǐng)批準(zhǔn)，違反了《食品衛(wèi)生法》的有關(guān)規(guī)定。
隨后蒙牛公司已經(jīng)按照有關(guān)執(zhí)法部門的意見(jiàn)停止在產(chǎn)品中添加OMP，并表示將按照法律規(guī)定提出申請(qǐng)。有關(guān)執(zhí)法監(jiān)管部門將進(jìn)一步對(duì)該企業(yè)的違法行為作出處理。
在6個(gè)政府機(jī)構(gòu)聯(lián)合的結(jié)論中，還有一個(gè)意見(jiàn)意味深長(zhǎng)，即指出蒙?！吧米钥浯笮麄鳟a(chǎn)品功能”?！疤貋鎏K”是蒙牛的高端產(chǎn)品，而“夸大宣傳產(chǎn)品功能”的結(jié)果則是“特侖蘇”的價(jià)格比之普通牛奶要貴出許多。政府部門的這個(gè)定性，換個(gè)說(shuō)法，可以理解為，“特侖蘇”的實(shí)際價(jià)值與其宣傳的價(jià)值脫節(jié)了。這么一個(gè)通過(guò)上海一家進(jìn)出口公司進(jìn)口的、由一家新西蘭公司生產(chǎn)的、已經(jīng)有20多年銷售歷史的添加物，被炒作成一個(gè)“增加骨骼密度，防止骨量丟失”的“自主研發(fā)創(chuàng)新”的成就，實(shí)在讓人“不知其可”。
此刻，這個(gè)同齡人就坐在《創(chuàng)業(yè)家》記者面前。跟廣為流傳的照片相比，李想的發(fā)型變短了，身穿深色的圓領(lǐng)衛(wèi)衣顯得更為成熟。褪去早期刻意打造的時(shí)尚形象，此刻的李想才是真實(shí)的李想。
當(dāng)記者向他聊起另一個(gè)80后成功人物戴志康時(shí)，李想不禁揶揄：他總是一副苦逼樣。李和戴是很好的朋友，每隔幾個(gè)月就會(huì)見(jiàn)一次，他們甚至共同投資過(guò)一個(gè)小公司。
多年以來(lái)，李和戴作為80后成功創(chuàng)業(yè)者的代表被相提并論，但如今李想已不如戴志康那么活躍。戴志康無(wú)論在哪個(gè)創(chuàng)業(yè)階段，總是做火車頭，帶著康盛創(chuàng)想哼哧哼哧往前跑，越跑越累，錢賺得很辛苦，索性賣給騰訊。李想不一樣，他不做大哥已經(jīng)好多年。
以下是《創(chuàng)業(yè)家》對(duì)李想的采訪。
《創(chuàng)業(yè)家》：當(dāng)年接受澳洲電訊控股是怎樣的一個(gè)選擇？
李想：我覺(jué)得這是當(dāng)時(shí)最好的選擇，人做好每個(gè)階段的選擇就行了?，F(xiàn)在回頭去看，我當(dāng)時(shí)做的選擇不如很多公司的選擇好，是因?yàn)槲耶?dāng)時(shí)沒(méi)有那個(gè)能力，你不可能讓我25歲有30歲的能力，30歲有50歲的能力。
《創(chuàng)業(yè)家》：汽車之家是你和樊錚一手締造的，后來(lái)秦致空降做CEO，你甘當(dāng)副總裁，這里面的原因是什么？
李想：秦致是投資人薛蠻子介紹過(guò)來(lái)的，如果我覺(jué)得秦致不好，薛蠻子怎么空降都降不進(jìn)來(lái)。我們接受秦致也并不草率，團(tuán)隊(duì)幾乎所有人都認(rèn)可了，他才進(jìn)來(lái)。我們擅長(zhǎng)做產(chǎn)品，但是管理和銷售經(jīng)驗(yàn)都非常欠缺。秦致有我們所缺的東西。
《創(chuàng)業(yè)家》：如果秦致沒(méi)進(jìn)來(lái)，你們可能會(huì)怎樣？
李想：不知道，可能會(huì)多走很多彎路，可能就會(huì)輸了。我們當(dāng)時(shí)賭一個(gè)汽車市場(chǎng)的扭轉(zhuǎn)期，覺(jué)得汽車市場(chǎng)會(huì)從賣方市場(chǎng)變成買方市場(chǎng)，我們有機(jī)會(huì)能夠在市場(chǎng)逆轉(zhuǎn)的時(shí)候成為汽車網(wǎng)站的第一。我們就賭這個(gè)周期。
《創(chuàng)業(yè)家》：你現(xiàn)在每天的狀態(tài)和之前有什么不一樣嗎？
李想：沒(méi)什么不一樣啊，每天的工作狀態(tài)都差不多，仍然每天工作10個(gè)小時(shí)，因?yàn)槲蚁矚g這個(gè)事情（汽車與互聯(lián)網(wǎng)）。
《創(chuàng)業(yè)家》：你對(duì)目前這種狀態(tài)滿意嗎？將來(lái)還有什么規(guī)劃？
李想：我對(duì)自己從來(lái)都很滿意，但也不能叫“滿意”，我覺(jué)得我能非常好、沒(méi)有怨言地接受現(xiàn)狀，因?yàn)檫@些都是我自己做出的選擇。至于將來(lái)，沒(méi)想這么多。
《創(chuàng)業(yè)家》：汽車之家營(yíng)收從2007年的1000萬(wàn)元做到2012年的9億元，最關(guān)鍵的原因是什么？
李想：第一，可能是運(yùn)氣好，我們做得不早也不晚，正好趕在汽車增長(zhǎng)的高峰期。第二，我認(rèn)為我們是所有汽車網(wǎng)站里面最會(huì)做互聯(lián)網(wǎng)的，因?yàn)楝F(xiàn)在的汽車網(wǎng)站99%都算不上互聯(lián)網(wǎng)公司，他們沒(méi)有運(yùn)用互聯(lián)網(wǎng)的生產(chǎn)力。第三，我們只做對(duì)消費(fèi)者最有用的事，你在汽車之家上看不到美女模特之類的東西，我們喜歡把基礎(chǔ)的事情做好。
《創(chuàng)業(yè)家》：你所指的互聯(lián)網(wǎng)生產(chǎn)力是什么？
李想：我們是一個(gè)真正的平臺(tái)，表面上看我們的編輯在寫文章，但是我們95%以上的內(nèi)容都是用戶提供的，我們的報(bào)價(jià)也是經(jīng)銷商提供的，我們寫文章是為了引導(dǎo)用戶寫文章。如果按論壇互動(dòng)的流量來(lái)算，我們的頁(yè)面訪問(wèn)量早就超過(guò)了豆瓣，僅次于天涯，而且有可能今年就會(huì)超過(guò)天涯，成為國(guó)內(nèi)最大的論壇。
《創(chuàng)業(yè)家》：你此前做泡泡網(wǎng)的經(jīng)驗(yàn)對(duì)后來(lái)做汽車之家有什么幫助？
李想：一定要抓住行業(yè)變化周期。我們做泡泡網(wǎng)的時(shí)候就是錯(cuò)失了這個(gè)周期，這個(gè)周期被ZOL抓走了，所以做泡泡網(wǎng)做不到第一。
目的對(duì)炒麥芽含藥血清中α溴隱停進(jìn)行定性定量分析。方法以炒麥芽中已知含有的成分α溴隱停作為對(duì)照品，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物家兔灌胃飼服炒麥芽，應(yīng)用高效液相色譜法分別比較了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物家兔炒麥芽含藥血清、陽(yáng)性對(duì)照藥物溴隱停含藥血清及空白不含藥血清的高效液相色譜圖，建立α溴隱停定量檢測(cè)的方法學(xué)。結(jié)果α溴隱停和炒麥芽含藥血清及含溴隱停血清成分一部分峰相同，而空白血清在相同保留時(shí)間并沒(méi)有該峰形，HPLC法最終測(cè)得炒麥含藥血清中α溴隱停含量為(0.070 2±0.01) μg/g。結(jié)論 家兔經(jīng)炒麥芽灌胃后，血中有炒麥芽源性的α溴隱停移行成分，性質(zhì)并未發(fā)生改變，建立了該成分定量分析的方法學(xué)操作規(guī)范。
【關(guān)鍵詞】 炒麥芽 高效液相色譜 α 溴隱停
Abstract：ObjectiveTo do quantitative and qualitative analysis for the α-Ergolactin in the stir-baked malt contained rabbit blood serum.MethodsTaking αErgolactin as reference， HPLC was used to compare rabbit stir-baked malt contained blood serum，Bromocriptine contained blood serum and blank blood serum.ResultsBoth the stir-baked malt contained blood serum and Bromocriptine contained blood serum had a part of the same peak in the HPLC chromatogram as αErgolactin reconstituent， obviously different with the blank blood serum. ConclusionAfter intragastric administration of rabbit by stir-baked malt，it`s reconstituents can be aborted into blood， it has the same αErgolactin reconstitute as the positive control medicine Bromocriptine.
Key words:Stir-baked malt; HPLC; αErgolactine;
α溴隱停是炒麥芽的成分之一，也是臨床用于治療垂體泌乳素腺瘤的甲磺酸溴隱停成分，因此可能是炒麥芽中對(duì)垂體泌乳素腺瘤具有治療作用的活性成分之一。本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用高效液相色譜法，對(duì)炒麥芽含藥血清可能存在的α溴隱停成分進(jìn)行定性定量分析。
1 器材
1.1 儀器GilsonGADE型高效液相色譜儀；712數(shù)據(jù)分析系統(tǒng) UV/VS118c；紫外檢測(cè)器Sinochrom ODSBP(5 μm，4.6 mm×250 mm大連伊利特)；802型高速離心機(jī)；H66MC型超聲震儀。
1.2 試劑
乙腈，HPLC級(jí)，美國(guó)迪馬（DIKMA）試劑公司；甲醇，HPLC級(jí)，美國(guó)天地（TEDIA）試劑公司；水，娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司）；其余試劑為分析純。
1.3 對(duì)照品及樣品
炒麥芽購(gòu)于湖北省十堰市人民醫(yī)院藥劑科；α溴隱停，購(gòu)于中國(guó)生物制品藥品檢定所，批號(hào)10753。事先制取家兔〔SCXK（鄂）20052008〕空白血清炒麥芽含藥血清及溴隱停含藥血清，經(jīng)劑量換算后，按臨床常用量給予灌胃，3次/d給予灌胃，連續(xù)7 d，在第7日灌胃后1.5 h，從心臟無(wú)菌取血5 ml，1 500 r/min，離心15 min，制取含藥血清。
2 方法與結(jié)果
2.1 上樣樣品的制備α溴隱停對(duì)照品制備及樣品含藥血清、溴隱停含藥血清和空白血清血樣處理：取α溴隱停2.5 mg到25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度即得。20 μl進(jìn)樣。取血清300 μl置1 ml離心管中10管，加甲醇700 μl，振搖5 min，超聲5 min，10 000 r/min離心，取上清液N2揮干，濃縮10倍，100 μl流動(dòng)相溶解， 20 μl進(jìn)樣。
2.2 流動(dòng)相流動(dòng)相為乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液＝55∶45；柱溫40℃; 流速1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)300 nm；AUFS＝0.05。在此條件下，炒麥芽含藥血清樣品的HPLC色譜圖中α－溴隱停吸收峰與其他成分的吸收峰達(dá)到基線分離，可以進(jìn)行α－溴隱停移行成分的定性定量分析測(cè)定。
2.3 炒麥芽含藥血清中α溴隱停移行成分的定性分析見(jiàn)圖1。
α溴隱停和炒麥芽含藥血清在90 min附近出峰時(shí)間相同，空白血清此時(shí)無(wú)特征峰，家兔經(jīng)炒麥芽灌胃后血中有炒麥芽源性α溴隱停成分。
2.4 方法學(xué)考察及含量測(cè)定
2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制α溴隱停對(duì)照品溶液分別手動(dòng)進(jìn)樣2.5，5，10，15，20 μl，測(cè)得α溴隱停的峰面積，以質(zhì)量Y與色譜峰面積X做標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：lgY=1.346+2.72lgX (r=0. 971 3)，表明α溴隱停在1.0 ～3.00 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，結(jié)果見(jiàn)表1。表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制結(jié)果（略）
2.4.2 精密度實(shí)驗(yàn)取同一濃度的α溴隱停標(biāo)準(zhǔn)品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，5 μl/次，測(cè)得α溴隱停峰面積，峰面積平均對(duì)數(shù)值為3.734， RSD=0.321% (n=5) 表明儀器精密度良好。結(jié)果見(jiàn)表2。表2 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.4.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一炒麥芽含藥血清樣品供試液，分別于0，2，4，6，8 h進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果表明α溴隱停色譜峰面積對(duì)數(shù)的平均值為3.732，RSD=0.331%(n=5)。表明供試炒麥芽含藥血清在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。見(jiàn)表3。表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.4.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批供試用家兔炒麥芽含藥血清5份，照樣品測(cè)定方法處理并測(cè)定。結(jié)果表明，α－溴隱停平均含量為0.04 μg/g，RSD=0.364%(n=5)。表明該方法重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表4。表4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.4.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量供試用炒麥芽含藥血清(α溴隱停含量為0.06 ug/g)5份，每份約5 g，精密稱定，加入一定量的α溴隱停對(duì)照品，按2.1項(xiàng)加以操作，在上述色譜條件下進(jìn)行分析.結(jié)果表明， α溴隱停平均加樣回收率為95.67%，RSD=1.05(n=5)。表明該方法可靠。結(jié)果見(jiàn)表5。表5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）
2.4.6 炒麥芽含藥血清中α溴隱停含量的測(cè)定按炒麥芽含藥血清供試樣品制備方法制取5批含藥血清，每批樣進(jìn)樣20 μl，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定其中的α溴隱停。結(jié)果見(jiàn)表6。表6 炒麥芽含藥血清中α-溴隱停的含量測(cè)定（略）
3 討論
中國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中，炒麥芽對(duì)乳汁分泌具有調(diào)控作用［4］，可用于高泌乳素血癥的治療［1，3，5］。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)其中含有α溴隱停成分［6］，由于和臨床治療垂體泌乳素腺瘤藥物甲磺酸溴隱?；瘜W(xué)結(jié)構(gòu)類似［2］，可能是炒麥芽治療垂體泌乳素腺瘤的活性成分［3］。為探討炒麥芽口服后血清中是否有α溴隱停成分存在以及有無(wú)變化，給予大耳白兔炒麥芽浸汁灌胃，采血分離含藥血清，采用高效液相色譜法，對(duì)其進(jìn)行了定性定量檢測(cè)，并以臨床常用藥溴隱停含藥血清為對(duì)照，為課題后續(xù)開展奠定基礎(chǔ)。
本實(shí)驗(yàn)建立了HPLC檢測(cè)α溴隱停含量測(cè)定方法，炒麥芽中α溴隱停成分可被吸收入血且性質(zhì)未發(fā)生變化。測(cè)定結(jié)果表明炒麥芽含藥血清中α溴隱停含量是（0.070 2±0.01）μg/ml，陽(yáng)性對(duì)照藥物溴隱停含藥血清中的含量是（0.081 3±0.02）μg/ml左右，二者含量相近。以α溴隱停含量而言臨床大劑量炒麥芽可能具有類似溴隱停治療結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)中，炒麥芽含藥血清HPLC圖譜，α溴隱停特征峰外仍有許多波峰出現(xiàn)，表明炒麥芽含藥血清成分多樣。炒麥芽入血成分中，不僅α溴隱停成分，其它成分也可能是起作用。
由于不同的色譜柱對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有一定的影響，課題組參考相關(guān)文獻(xiàn)［7］采用Sinochrom ODS-BP(5μm，4.6 mm×250 mm大連伊利特)色譜柱，出峰較多，峰形較好，故加以選用；在洗脫系統(tǒng)中，分別參考了甲醇-水、乙腈-水及乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液＝55∶45系統(tǒng)，鑒于前兩者基線漂移嚴(yán)重，出峰較少，且峰形不好，而乙腈：30 mmol/L醋酸銨溶液＝55∶45系統(tǒng)出峰較多，峰形較佳，且色譜峰分離度好，保留時(shí)間適中，分離明顯優(yōu)于甲醇：水、乙腈：水，反復(fù)摸索兩者比例最終選用；檢測(cè)波長(zhǎng)，選用300 nm，出峰較多，分離度較好；在提取溶劑選擇上，分別比較了水、乙醇及甲醇，發(fā)現(xiàn)水提物出峰較少，而乙醇提取物基線有漂移現(xiàn)象，最終選用甲醇作為提取溶劑。參照物選擇上，由于檢測(cè)目標(biāo)是α－溴隱停成分，而在HPLC分析過(guò)程中，該成分出峰面積較明顯，且保留時(shí)間適中而穩(wěn)定，可以獲得標(biāo)準(zhǔn)品，所以仍加以選用。
在本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，炒麥芽含藥血清HPLC色譜圖有許多特征峰，說(shuō)明該法有效，可用于炒麥芽含藥血清藥物的化學(xué)定性定量分析。
參考文獻(xiàn)
［1］Peter J. Yeh and Jefferson W. Chen. Pituitary tumors: surgical and medicalmanagement［J］. J. Surgical Oncology.2004，6(2)：67.
［2］Watanabe M． Ant/oxidative phenolic compounds from Japanese barnyard millet Echinochloa utilis)grains［J］.Agric Food Chem ，1999，47：4500.
［3］楊海燕.中醫(yī)藥治療高泌乳素血癥的研究進(jìn)展［J］.遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(2):34.
［4］胡熙明，張文康，朱慶生，等．中華本草，第8冊(cè)，第22卷［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：7443.
［5］鄺安坤，丁 霆，陳家倫，等．麥芽對(duì)催乳素的影響及在乳溢癥治療上的嘗試［J］.中西醫(yī)結(jié)合雜志，1984，4(3)：134.
[關(guān)鍵詞] 斷腸草；水提液；特異性PCR；分子鑒定
[收稿日期] 2013-01-16
[基金項(xiàng)目] 北京市科技專項(xiàng)“道地中藥功能基因組北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室2012年階梯計(jì)劃項(xiàng)目”；貴州省中藥現(xiàn)代化科技產(chǎn)業(yè)研究開發(fā)專項(xiàng)（黔科合ZY字[2013]3001號(hào)）；公安部重點(diǎn)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2013012DYJD07）
[通信作者] *袁媛，E-mail： 斷腸草為馬錢科植物鉤吻 Gelsemium elegans （Gardn.el Champ） Benth. 的莖藤。又名胡蔓藤、野葛、水莽草、大茶葉、爛腸草，是一種劇毒草藥[1]。有祛風(fēng)攻毒、消腫、止痛之功效。可治濕疹、癰腫、風(fēng)濕痹痛等[2-3]。由于斷腸草常常纏繞和混雜在其他植物中，且其花蕾形狀與具有清熱解毒功能的金銀花 Lonicera japonica Thunb.極為相似。由于二者較難辨認(rèn)、容易混淆，近年來(lái)調(diào)查發(fā)現(xiàn)誤將斷腸草為金銀花煮水當(dāng)涼茶喝而中毒的事件時(shí)有發(fā)生，在斷腸草中毒的78例臨件中，發(fā)現(xiàn)43例為因誤將斷腸草為金銀花煮水當(dāng)涼茶喝而中毒[4]。因此，建立一種用于快速鑒別斷腸草和金銀花水提液的方法對(duì)保障人民群眾生命安全是十分重要的。
目前，國(guó)內(nèi)外一般采用高效液相色譜法、氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法等通過(guò)分析斷腸草中的生物堿的含量對(duì)斷腸草進(jìn)行鑒定[5-8]；但這些方法比較繁瑣，不利于推廣。近年來(lái)，藥材分子鑒別技術(shù)如DNA條形碼、位點(diǎn)特異性PCR等方法迅速發(fā)展，其克服了藥材傳統(tǒng)鑒別方法中樣品需求量大、主觀性大等問(wèn)題。其中位點(diǎn)特異性PCR方法已成功用于人參、陳皮、藁本、金銀花等中藥材的真?zhèn)舞b別[9-12]，但對(duì)斷腸草與金銀花等易混品之間的分子鑒別還尚未見(jiàn)報(bào)道，而且通過(guò)分子手段鑒別藥材水提液的報(bào)道也相對(duì)較少。本研究建立了水提山銀花藥材的DNA提取方法，同時(shí)通過(guò)特異性PCR的方法實(shí)現(xiàn)了斷腸草與金銀花類藥材水提液的快速、準(zhǔn)確鑒別，為今后中毒診斷提供參考依據(jù)。
1 材料
2×CTAB提取液，1×TAE緩沖液，瓊脂糖（Promega公司），溴化乙錠（Fluka公司），DNA Taq 聚合酶（Takara公司），2 000 bp DNA Markar（Takara公司），三氯甲烷﹑無(wú)水乙醇﹑異丙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純。
PCR儀（德國(guó)Eppendorf， 型號(hào)5332），電泳系統(tǒng)（北京市六一儀器廠，型號(hào)DYY-12），低溫冷凍離心機(jī)（德國(guó)Eppendorf， 型號(hào)5810R），紫外凝膠成像分析儀（英國(guó)Syngene， 型號(hào)GBOXHR），混合型球磨儀（德國(guó)Retsch，型號(hào)MM400），數(shù)控超聲波清洗器（型號(hào)KQ-500DE），微量移液器（德國(guó)Eppendorf）。
本實(shí)驗(yàn)選取71份材料：包括采自廣西的斷腸草7份；采自貴州的斷腸草3份，采自安徽的斷腸草3份，金銀花25份，分別采自山東、河南、廣西、江蘇和北京；山銀花20份，分別采自廣西、云南、貴州和山東；水銀花5份，采自廣西；以及7批購(gòu)自市場(chǎng)上經(jīng)過(guò)炮制處理的金銀花藥材和1批山銀花樣品。憑證標(biāo)本保存于中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心和廣西藥用植物園，見(jiàn)表1。
表1 實(shí)驗(yàn)材料
Table 1 Plant samples
2 方法
2.1 鑒別引物的設(shè)計(jì) 選擇通用引物 psbA-trnH （上游引物 psbA：5′-GTT ATGCATGAACGTAATGCTC-3′；下游引物 trnH：5′-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC -3′）對(duì)斷腸草樣品進(jìn)行擴(kuò)增，經(jīng)過(guò)PCR擴(kuò)增后，PCR產(chǎn)物由北京六合華大基因科技股份有限公司測(cè)序部測(cè)序。搜索Genbank中金銀花的 psbA-trnH 序列（Genbank登錄號(hào)GU1353313.1；JN045253.1），然后進(jìn)行同源比對(duì)，根據(jù)其變異區(qū)使用primer premier 5.0軟件設(shè)計(jì)一對(duì)特異引物GEF1/GER1，設(shè)計(jì)的特異引物擴(kuò)增片段大小為97 bp，引物序列見(jiàn)表2。
2.2 藥材水提液的總DNA提取 取1.0 g斷腸草和金銀花類藥材的干燥粉末，加入50 mL蒸餾水，沸水煮30 min。冷卻放置室溫，用濾紙濾過(guò)，吸取上清溶液25 mL，加入30%乙醇10 mL，輕微振搖混勻15 min，離心30 min （ 6 000 r·min-1）。離心后棄上清，沉淀加入CTAB提取液，采用CTAB法進(jìn)行DNA提取。提取后的DNA采用特異性引物進(jìn)行擴(kuò)增。反應(yīng)體系總體積為20 μL，包括10×buffer緩沖液2 μL， dNTP1.6 μL，引物各0.5 μL， EX Taq 酶0.2 μL，25% PVP 0.5 μL，BSA 0.2S5 μL，DNA0.5 μL，滅菌蒸餾水13.95 μL。進(jìn)行如下反應(yīng)：解鏈溫度95 ℃，時(shí)間5 min，退火溫度53 ℃，時(shí)間30 s，復(fù)性溫度72 ℃，時(shí)間為45 s， 35個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸7 min，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物。分別取3 μL擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。
2.3 模板DNA質(zhì)量的檢測(cè) 為了保證特異性PCR的擴(kuò)增成功率，對(duì)不同樣品的DNA進(jìn)行了質(zhì)量檢測(cè)。取不同樣品DNA，終濃度約為10 mg·L-1，使用通用引物psbA和trnH進(jìn)行PCR反應(yīng)以檢測(cè)模板DNA質(zhì)量。反應(yīng)體系總體積為20 μL，包括10×buffer緩沖液2 μL， dNTP 1.6 μL，引物各0.5 μL， EX Taq 0.2 μL，DNA 0.5 μL，滅菌蒸餾水14.7 μL，約10 ng模版DNA。PCR反應(yīng)液配制完后，輕輕震蕩混勻，將PCR管放入PCR儀中，進(jìn)行如下反應(yīng)：解鏈溫度95 ℃，時(shí)間5 min；退火溫度57 ℃，時(shí)間30 s；復(fù)性溫度72 ℃，時(shí)間為1 min 40 s；35個(gè)循環(huán)后72 ℃延伸7 min，獲得擴(kuò)增產(chǎn)物。取3 μL擴(kuò)增產(chǎn)物，采用1%的瓊脂糖凝膠，在電壓100～150 V下電泳15 min，凝膠成像系統(tǒng)下觀察并拍照。
2.4 水煮時(shí)間、樣品量、通用引物對(duì)水提山銀花藥材擴(kuò)增的影響 根據(jù)上述提取DNA的方法，選取水提山銀花藥材DNA作為模板，并分別對(duì)以下因素：①不同水煮時(shí)間、②不同提取樣品量、③不同通用引物進(jìn)行了研究，引物序列見(jiàn)表2。
3 結(jié)果及討論
3.1 藥材水提液DNA提取及質(zhì)量檢測(cè) DNA的提取是分子鑒別的關(guān)鍵步驟，本研究用于提取DNA的樣品為水煮藥材后的溶液，因此給DNA提取帶來(lái)很大的困難。本文采用了首先對(duì)溶液中的DNA進(jìn)行富集，然后再利用CTAB法進(jìn)行提取的策略。
通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)藥材水提液DNA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)提取出的DN段呈彌散狀態(tài)，分析可能是由于高溫水煮后造成DNA的降解。
3.2 藥材水提液提取方法 在上述建立的藥材水提液DNA提取方法基礎(chǔ)上，本文利用山銀花藥材分別考察了水提時(shí)間（30， 60， 90， 120，150， 180， 210， 240 min），藥材質(zhì)量（0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 g）對(duì)PCR擴(kuò)增效率的影響。擴(kuò)增引物為ITS通用引物。結(jié)果表明，在0.5～4 h的水提時(shí)間和4.0～24.0 g·L-1的藥材質(zhì)量與水提液體積比例，提取的水溶液DNA均可以有效的擴(kuò)增出ITS DNA條帶。
3.3 不同通用引物擴(kuò)增藥材水提液DNA 為了進(jìn)一步分析藥材水提液DNA對(duì)PCR反應(yīng)中不同引物的適應(yīng)性，以山銀花水提液DNA為模板，利用 rbc L （1F/724R）， psbA-trnH （psbA/trnH），ITS （ITS2F/ 表2 本實(shí)驗(yàn)中的引物及反應(yīng)條件
Table 2 Primers and reaction conditions for study
ITS2R）， trn L-trn F（trnL/trnF），matK（3F/1R）引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。結(jié)果表明，使用以上通用引物在山銀花水提液DNA中均可擴(kuò)增出條帶。
3.4 鑒別特異性PCR引物設(shè)計(jì) 選擇通用引物 psbA-trnH 對(duì)斷腸草樣品進(jìn)行PCR擴(kuò)增，搜索Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)中金銀花的 psbA-trnH 序列，然后通過(guò)ClastulW軟件進(jìn)行序列比對(duì)。兩物種 psbA-trnH 序列相似度僅為12.15%，且存在350 bp的大片段缺失，根據(jù)其變異區(qū)采用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)特異性鑒別引物GEF1/GER1，鑒定片段大小為97 bp。
利用特異性PCR方法對(duì)特異性鑒別引物進(jìn)行驗(yàn)證，選取13個(gè)斷腸草、25個(gè)金銀花、20個(gè)山銀花、5個(gè)山銀花及7批不同藥店采購(gòu)的金銀花藥材和1批山銀花藥材DNA 為模板進(jìn)行PCR，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在斷腸草樣品DNA中可以擴(kuò)增出一條帶，而金銀花類藥材DNA則擴(kuò)增不出條帶，表明本研究所設(shè)計(jì)的特異性鑒別引物GEF1和GER1可以作為斷腸草和金銀花類藥材及其水提液的鑒別引物。
3.5 斷腸草及金銀花類藥材及其水提液特異性PCR鑒別 利用特異性鑒別引物GEF1和GER1對(duì)部分?jǐn)嗄c草、金銀花和山銀花水提液DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果見(jiàn)圖1。斷腸草可擴(kuò)增出97 bp片段，而金銀花類藥材則不能擴(kuò)增出條帶。
4 小結(jié)
通常人們誤服斷腸草水煮液中毒，因此找出一種鑒別斷腸草水提液的方法至關(guān)重要。本研究建立了一種斷腸草與金銀花類藥材水提液DNA提取的方法，這為鑒別斷腸草水提液提供了基礎(chǔ)。利用特
1. 斷腸草水提液（廣西）；2. 斷腸草水提液（安徽）；3. 斷腸草（貴州）；4. 金銀花（河南）；5. 金銀花（廣西）；6. 金銀花水提（江蘇）；7. 金銀花（北京）；8. 山銀花（廣西）；9. 山銀花（云南）；10. 山銀花水提液（貴州）；11. 水銀花（廣西）12. 空白對(duì)照。M.DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)：從上至下依次為2 000，1 000，750，500，250，100 bp。
圖1 斷腸草及金銀花類藥材水提液特異性PCR鑒別
Fig.1 Specific PCR amplification of Gelsemium elegans and Lonicera japonica and its close species
異性PCR方法可解決斷腸草與金銀花類藥材水提液的鑒別問(wèn)題，該方法簡(jiǎn)單、快速，重復(fù)性強(qiáng)，利于推廣。同時(shí)也將為今后有關(guān)斷腸草中毒事件的分析與鑒定提供新的思路。
[參考文獻(xiàn)]
[1] 李秉滔.中國(guó)植物志.第61卷.馬錢科[M].北京：科學(xué)出版社，1992：251.
[2] Rujjanawate C，Kanjanapothi D，Panthong A. Pharmacological effect and toxicity of alkaloids from Gelsemium elegans Benth[J]. J Ethnopharmacol，2003， 89：91.
[3] 國(guó)家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會(huì).中華本草. 第17卷.馬錢科[M].上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：213.
[4] 李文升.急性斷腸草中毒78例臨床分析[J].醫(yī)學(xué)信息，2011， 24（9）：5872.
[5] 黃偉雄，李汴生，梁春穗，等. GC/MS測(cè)定斷腸草中鉤吻堿方法研究[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2008， 20（2）： 136.
[6] 黃偉雄，李汴生，范山湖，等. 應(yīng)用TLC法鑒定斷腸草中鉤吻堿[J].華南預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008， 34（1）： 60.
[7] 邰昌松，肖惠貞，劉開鉗. 用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)分析鉤吻堿中毒[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，1999，9（1）： 40.
[8] 鄧禮明， 黃俊鋒， 盧志堅(jiān)，等. 基層實(shí)驗(yàn)室快速檢測(cè)斷腸草中鉤吻堿的技術(shù)研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（4）： 777.
[9] Wang H， Kim M K， Kwon W S， et al. Molecular authentication of Panax ginseng and ginseng products using robust SNP markers in ribosomal external transcribed spacer region[J]. J Pharm Biomed Anal， 2011， 55（5）： 972.
[10] Wang H， Kim M K， Kim Y J， et al. Molecular authentication of the oriental medicines Pericarpium citri reticulatae and Citri unshius pericarpium using SNP markers[J]. Gene， 2012， 494（1）： 92.
[11] Jigden B， Wang H， Kyum K M， et al. Authentication of the oriental medicinal plant Ligusticum tenuissimum （Nakai） Kitagawa （Korean Go-Bon） by multiplex PCR[J]. Planta Med， 2010， 76（6）： 648.
[12] 蔣超，張雅華，陳敏，等. 基于雙向位點(diǎn)特異性PCR的金銀花真?zhèn)舞b別方法研究[J]. 中國(guó)中藥雜志，2012，37（24）：3752.
Study on molecular identification of water extracts from Gelsemium elegans and
Lonicera japonica and its close species by specific PCR amplification
CUI Zhan-hu1，2， JIANG Chao， HUANG Lu-qi1， LI Min-hui ZHOU Tao， ZHOU Li-she YUAN Yuan（1.National Resource Center for Chinese Materia Medica， China Academy of Chinese Medical Sciences， Beijing 100700， China；
2. Inner Mongolia University of Science and Technology， Baotou Medical College， Baotou 014060， China；
3. Guiyang Collage of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550002， China）
[Abstract] Objective： To explore the new method of discriminating Gelsemium elegans from Lonicera japonica and its close species by using specific PCR amplification. Method： Thirteen samples of the different G. elegans materials and 58 samples of L. japonica ， L. macranthoides and L. dasystyla were collected. The total DNA of the samples were extracted， and the DNA of G. elegans ， L. japonica and L. macranthoides water extracts were extracted. Psb A-trn H sequence from G. elegans was amplified by PCR and sequenced unidirectionally， ClustulW was used to align psb A-trn H sequences of the G. elegans and L. japonica and its close species from GenBank database. Result： All samples were amplified by PCR with specific primer， DNA from G. elegans would be amplified 97 bp whereas PCR products from all of Lonicera samples had not bands. Conclusion： Specific PCR amplification can be used to identify G. elegans from L. japonica and its close species successfully and is an efficient molecular marker for authentication of G. elegans and L. japonica and its close species.
【摘要】 目的 建立測(cè)定人血漿中依諾沙星濃度的高效液相色譜方法。方法 血漿樣品經(jīng)甲醇沉淀蛋白后，以乙腈∶0.05mol/L檸檬酸緩沖液(15∶85，pH3.5)為流動(dòng)相，經(jīng)HypersilBDS C18(4.6mm×150mm，5μm)色譜柱分離，345nm波長(zhǎng)檢測(cè)。結(jié)果 依諾沙星在0.05～5.0μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，低、中、高三個(gè)濃度的提取回收率為44.8%～51.1%，日內(nèi)、日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為3.15%～6.61%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確、快速，可滿足臨床藥動(dòng)學(xué)研究的要求。
【關(guān)鍵詞】 依諾沙星 高效液相色譜法 藥動(dòng)學(xué)
Determination of enoxacin in human plasma by
ABSTRACT Objective An HPLC method was established for determination of enoxacin in human serum. Methods Serum protein was precipitated with methanol. The analysis was conducted with a HypersilBDS C18 (4.6 mm×150 mm， 5μm) column， acetonitrile∶0.05 mol/L citric buffer (15∶85， pH3.5) as mobile phase， and the detecting wavelengh was at 345 nm. Results The linear range enoxacin was 0.05～5.0 μg/ml and the recoveries were in the range of 44.8%～51.1% at three different concentrations. The RSD of intra and interday were in the range of 3.15%～6.61%. Conclusion This method is suitable for the pharmacokinetic study of enoxacin.
KEY WORDS Enoxacin; HPLC; Pharmacokinetics
依諾沙星又名氟啶酸，是第三代喹諾酮類廣譜抗生素，通過(guò)作用于細(xì)菌DNA螺旋酶，抑制細(xì)菌DNA的合成和復(fù)制而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。臨床上用于敏感菌所致的急性呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化道及皮膚軟組織等感染的治療［1］。有關(guān)依諾沙星濃度測(cè)定的方法國(guó)內(nèi)、外都有報(bào)道，有采用LC/MS/MS法［2］、熒光法［3］、微生物法［4］、微透析法［5］，常用HPLC紫外檢測(cè)［6，7］。本文建立了測(cè)定血漿中依諾沙星的高效液相色譜法，該方法簡(jiǎn)便，快捷，并研究了該藥的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)行為，為臨床研究提供方法和依據(jù)。
1 儀器與試藥
HP1100系列高效液相色譜儀(Agilent公司)，GL20GII高速冷凍離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。依諾沙星對(duì)照品(含量99.7%，山東羅欣藥業(yè)股份有限公司提供)；依諾沙星片(山東新華制藥股份有限產(chǎn)品，規(guī)格為每片200mg，批號(hào)0501084)。甲硝唑?qū)φ掌?內(nèi)標(biāo)物，中國(guó)藥品生物制品檢定所)；乙腈、甲醇為色譜純；檸檬酸和三乙胺均為分析純?？瞻籽獫{由中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬二院輸血科提供。
2 方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱為HypersilBDS C18柱(4.6mm×150mm，5μm)；流動(dòng)相為乙腈∶檸檬酸緩沖液(15∶85，pH3.5)(緩沖鹽為每1000ml溶液加三乙胺6ml調(diào)至pH3.5)；流速1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)345nm；柱溫30℃。
2.2 血漿樣品處理
取血漿樣品0.5ml，于具塞塑料離心管中，補(bǔ)加50μl甲醇，加入內(nèi)標(biāo)(10μg/ml甲硝唑甲醇溶液)50μl，加甲醇1.0ml渦旋混合1min，10000r/min離心10min，移取上清液于另一潔凈試管中，55℃氮?dú)獯蹈缮锨澹?00μl甲醇溶解殘?jiān)?，?0μl上清液進(jìn)樣，記錄色譜圖。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線
取0.5ml空白血漿，依次加入濃度為0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、25.0和50.0μg/ml的依諾沙星標(biāo)準(zhǔn)系列的甲醇溶液50μl，配制相當(dāng)于0.05、0.10、0.25、0.50、1.0、2.5和5.0μg/ml的血漿樣品，按“2.2”項(xiàng)下的方法操作，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。以待測(cè)物濃度C為橫坐標(biāo)，待測(cè)物與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比(Y)為縱坐標(biāo)，用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸運(yùn)算，得直線回歸方程：
Y=0.8612C-0.00047 r=0.9977(n=3)
2.4 方法專屬性考察
在上述色譜條件下測(cè)得空白血漿、空白血漿加入標(biāo)準(zhǔn)品及實(shí)測(cè)血漿樣品的譜圖(Fig.1)。在本實(shí)驗(yàn)條件下依諾沙星的保留時(shí)間約為3.05min，內(nèi)標(biāo)甲硝唑保留時(shí)間約為4.48min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)對(duì)依諾沙星及甲硝唑無(wú)干擾。
2.5 方法精密度和回收率
制備濃度分別為0.1、0.5和2.5μg/ml的依諾沙星標(biāo)準(zhǔn)血漿樣品作為質(zhì)控(QC)樣品，按“2.2”項(xiàng)下依法操作，每個(gè)濃度6個(gè)樣本，連續(xù)測(cè)定3d，以當(dāng)日的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的測(cè)得濃度，與配制的濃度對(duì)照，求得本法的精密度與準(zhǔn)確度。另取相當(dāng)于0.1、0.5和2.5μg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，進(jìn)樣20μl，記錄峰面積，考察提取回收率。結(jié)果見(jiàn)Tab.1。
2.6 穩(wěn)定性考察
按“2.5”項(xiàng)下方法分別配制低、中、高三個(gè)濃度QC樣品，每個(gè)濃度進(jìn)行6樣本分析經(jīng)提取，室溫放置24h測(cè)定，結(jié)果RSD＜3%，表明血漿樣品室溫放置24h穩(wěn)定。同法配制低、中、高三個(gè)濃度的QC樣品，經(jīng)反復(fù)三次-20℃冰凍，室溫融化后測(cè)定樣品濃度，結(jié)果RSD＜5%，表明血漿樣品在凍融條件下穩(wěn)定。
2.7 藥動(dòng)學(xué)研究
A: Blank plasma; B: Plasma with standard material (2.5 μg/ml);
C: Plasma sample 1.5h after a single dose 1: Enoxacin; 2: IS
經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，選擇健康男性志愿者20名，平均年齡(22.4±0.8)歲，平均身高(1.73±0.05)m，平均體重(65.4±4.57)kg，試驗(yàn)前體格檢查心電圖、肝、腎功能等各項(xiàng)指標(biāo)均為正常。由本人簽署知情同意書。試驗(yàn)日晨空腹服用依諾沙星片400mg，分別于給藥前和給藥后0.33、0.67、1.0、1.5、2.0、3.0、4.0、6.0、9.0、12.0和24.0h取靜脈血4ml，置肝素離心管中，離心、分離血漿，按“2.2”項(xiàng)下方法操作，測(cè)定血漿中依諾沙星的濃度，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)tmax、cmax、t1/2和AUC分別為(1.29±0.59)h、(3.47±0.84)μg/ml、(7.23±1.20)h和(21.5±4.23)μg·h/ml。平均藥時(shí)曲線見(jiàn)Fig.2。
3 討論
依諾沙星的標(biāo)準(zhǔn)品溶液經(jīng)紫外掃描，最大吸收波長(zhǎng)分別在274和345nm，在實(shí)際測(cè)定中我們采用345nm，雖然沒(méi)有274nm處響應(yīng)值高，在實(shí)驗(yàn)條件下血漿內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)樣品和內(nèi)標(biāo)無(wú)干擾，且可滿足體內(nèi)樣品分析測(cè)定的需要。
本試驗(yàn)優(yōu)化了不同提取液、流動(dòng)相，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相在pH3.5的條件下分析依諾沙星和內(nèi)標(biāo)可得到很好的分離，且峰形對(duì)稱。采用有機(jī)溶劑提取、酸沉的方法均有內(nèi)源性干擾，而采用甲醇和乙腈直接沉淀蛋白的方法無(wú)內(nèi)源性干擾，用甲醇提取回收率相對(duì)要高，雖然回收率僅為50%左右，但高、中、低三個(gè)濃度下的提取回收率非常一致，提取物室溫放置穩(wěn)定，且無(wú)內(nèi)源性雜質(zhì)干擾，重現(xiàn)性好。每個(gè)樣品的分析時(shí)間僅為5min，適合
本文所獲得的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)［8，9］報(bào)道一致，為該藥臨床安全有效的應(yīng)用及個(gè)體化給藥提供了參考依據(jù)。本文所用的方法準(zhǔn)確、靈敏、快速，適用于藥動(dòng)學(xué)研究。
參考文獻(xiàn)
［1］ Henwood J M， Monk J P. Enoxacin. A review of its antibacterial activity， pharmacokinetic properties and therapeutic use ［J］. Drugs，1988，36(1):32
［2］ 周虹. LC/MS/MS法同時(shí)測(cè)定食品中喹諾酮類藥物［J］. 口岸衛(wèi)生控制，2005，10(3)：40
［3］ EspinosaMansilla A， Pena A M， Gomez D G， et al. HPLC determination of enoxacin， ciprofloxacin， norfloxacin and ofloxacin with photoinduced fluorimetric (PIF) detection and multiemission scanning application to urine and serum ［J］. J Chromatogr B，2005，822:185
［4］ 張莉蓉，喬海靈，王海學(xué). 依諾沙星膠囊在健康人體的藥物動(dòng)力學(xué)及相對(duì)生物利用度［J］. 中國(guó)臨床藥學(xué)雜志，2002，11(2)：89
［5］ 劉志東，李佳瑋，張立波. 微滲析技術(shù)研究依諾沙星眼用緩釋凝膠劑兔眼內(nèi)藥動(dòng)學(xué)［J］. 中國(guó)新藥雜志，2005，14(7)：867
［6］ 李彬，王海意，吳鴻范. 高效液相色譜法測(cè)定血清中依諾沙星濃度［J］. 天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，1(1)：30
［7］ Davis J D， Aarons L， Houston J B. Simultaneous assay of fluoroquinolones and theophylline in plasma by highperformance liquid chromatography ［J］. J Chromatogr，1993，621(1):105
【關(guān)鍵詞】行政事業(yè)單位 固定資產(chǎn) 管理
一、行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)管理存在的問(wèn)題
行政事業(yè)單位的同定資產(chǎn)是指行政單位占有或者使用的單位價(jià)值在規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)以上，使用年限在一年以上，并在使用過(guò)程中基本保持原有物質(zhì)形態(tài)的資產(chǎn)。行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)的核算管理工作，存在著諸多不規(guī)范、管理薄弱現(xiàn)象，主要表現(xiàn)在：
1、重購(gòu)輕管，固定資產(chǎn)閑置浪費(fèi)
行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)購(gòu)置的資金來(lái)源主要是財(cái)政撥款，由于重購(gòu)輕管思想作祟，造成單位固定資產(chǎn)購(gòu)置盲目。行政事業(yè)單位往往不是從本單位履行職能的需要出發(fā)，也很少對(duì)現(xiàn)有固定資產(chǎn)的使用效益進(jìn)行分析論證，只是“兩手向上，伸手要錢”，不怕攤子大，不怕東西多，對(duì)本單位資產(chǎn)進(jìn)行盲目配置。
2、固定資產(chǎn)管理制度不健全，資產(chǎn)管理責(zé)任不明確
在平時(shí)的財(cái)務(wù)管理中，多數(shù)行政事業(yè)單位由于領(lǐng)導(dǎo)的重視程度不夠，只注重對(duì)有嚴(yán)格的財(cái)務(wù)開支制度規(guī)定的單位公用經(jīng)費(fèi)的管理(比如對(duì)經(jīng)費(fèi)的開支權(quán)限、開支標(biāo)準(zhǔn)，差旅費(fèi)的開支標(biāo)準(zhǔn)，小車油料維修，集體福利等方面的規(guī)定較多而且較為具體和明確)。對(duì)固定資產(chǎn)管理的制度和規(guī)定不健全，只在會(huì)計(jì)賬面上做出反映，缺少實(shí)物登記賬；資產(chǎn)領(lǐng)用沒(méi)有記錄，手續(xù)不完備，造成固定資產(chǎn)資產(chǎn)管理責(zé)任的不明確。
3、賬實(shí)不符問(wèn)題
賬實(shí)相符是確保會(huì)計(jì)信息質(zhì)量真實(shí)、準(zhǔn)確的基本要求。造成賬實(shí)不符的原因，一是同定資產(chǎn)采購(gòu)時(shí)項(xiàng)目被挪用，形成固定資產(chǎn)虛列；二是因歷史原因違規(guī)購(gòu)建固定資產(chǎn)，而不入同定資產(chǎn)賬或部分入賬；三是會(huì)計(jì)差錯(cuò)，即已報(bào)廢、盤虧的固定資產(chǎn)未及時(shí)進(jìn)行賬務(wù)處理。
4、缺乏行之有效的監(jiān)管機(jī)制
存在同定資產(chǎn)的盤點(diǎn)不及時(shí)，出售、報(bào)廢、轉(zhuǎn)讓固定資產(chǎn)不按規(guī)定的程序辦理，以至于有部分固定資產(chǎn)早已不存在，單位領(lǐng)導(dǎo)卻一無(wú)所知，或即使知道也不愿意加以處理，形成長(zhǎng)期掛賬。再者有部分領(lǐng)導(dǎo)對(duì)于固定資產(chǎn)的處理過(guò)于輕率，有部分可以追回的資產(chǎn)或是礙于情面，或是怕麻煩不予追回，大筆一揮加以報(bào)損，造成資產(chǎn)的嚴(yán)重流失。單位機(jī)動(dòng)車輛或其他固定資產(chǎn)出售、轉(zhuǎn)讓或報(bào)廢時(shí)不按規(guī)定的程序辦理相關(guān)手續(xù)。具體表現(xiàn)在：不對(duì)有關(guān)資產(chǎn)進(jìn)行評(píng)估，擅自定價(jià)，或雖已報(bào)廢，也未及時(shí)進(jìn)行賬務(wù)處理，造成有賬無(wú)物，在財(cái)產(chǎn)清查時(shí)形成財(cái)產(chǎn)損失。
5、固定資產(chǎn)利用率低
由于固定資產(chǎn)管理薄弱，內(nèi)部控制度不健全，使得一些單位固定資產(chǎn)大量閑置，而另一些單位又重復(fù)購(gòu)置固定資產(chǎn)，這樣就一方面造成了同定資產(chǎn)利用率低下，另一方面加大了財(cái)政支出的壓力。
二、固定資產(chǎn)管理問(wèn)題的原因分析
1、制度不健全。行政事業(yè)單位會(huì)計(jì)核算的相關(guān)的法律法規(guī)不夠健全是導(dǎo)致行政事業(yè)單位周定資產(chǎn)管理存在問(wèn)題的外部因素。與企業(yè)相比，我國(guó)事業(yè)單位的核算相關(guān)法律法規(guī)不夠健全，更新也不夠及時(shí)，沒(méi)有形成一整套完善的約束機(jī)制。同時(shí)，現(xiàn)行的會(huì)計(jì)制度還規(guī)定，行政事業(yè)單位的固定資產(chǎn)均不計(jì)提折舊，在報(bào)表上不反映同定資產(chǎn)的凈值，使得資產(chǎn)負(fù)債表反映不出固定資產(chǎn)的磨損程度。隨著時(shí)間的推移，固定資產(chǎn)的賬面價(jià)值與實(shí)際價(jià)值背離的程度越來(lái)越大，形成資產(chǎn)總量的虛增。
2、管理機(jī)構(gòu)設(shè)置不規(guī)范。在宏觀管理層面上，有些行政事業(yè)單位國(guó)有資產(chǎn)的宏觀管理部門是財(cái)政部門，而有些單位則是國(guó)資部門。財(cái)政部門與國(guó)資部門的管理權(quán)限不清、職能交叉。
3、管理層對(duì)周定資產(chǎn)的使用和管理重視不夠。行政事業(yè)單位的所有物品、錢財(cái)均是單位的資產(chǎn)，其本質(zhì)是一致的，只是存在形式上的差異。但是由于固定資產(chǎn)在購(gòu)買時(shí)一次性攤銷成本，使用過(guò)程中不再計(jì)提折舊，這就不可避免地造成一種假象。即貨幣資產(chǎn)比實(shí)物資產(chǎn)更加重要，導(dǎo)致管理層對(duì)固定資產(chǎn)的使用和管理不夠重視。
4、內(nèi)部制度不夠完善進(jìn)一步導(dǎo)致了管理的弱化。單位固定資產(chǎn)內(nèi)部控制制度不健全，大部分單位沒(méi)有建立固定資產(chǎn)購(gòu)置、保管、使用、維護(hù)、調(diào)撥、報(bào)廢和盤存等相關(guān)制度。多數(shù)行政
事業(yè)單位國(guó)有資產(chǎn)管理都是由財(cái)會(huì)機(jī)構(gòu)兼管，管得很不到位，財(cái)務(wù)人員不太了解固定資產(chǎn)的屬性，這限制了固定資產(chǎn)管理制度的完善和管理效果的提高。
5、人員因素。多數(shù)行政事業(yè)單位國(guó)有資產(chǎn)管理都是由財(cái)會(huì)機(jī)構(gòu)兼管，由于專業(yè)的限制，管得很不到位，財(cái)務(wù)人員不太了解固定資產(chǎn)的屬性，這限制了固定資產(chǎn)管理制度的完善和管理效果的提高。另外有部分財(cái)務(wù)人員業(yè)務(wù)素質(zhì)不高，對(duì)部分物品是否應(yīng)記入固定資產(chǎn)難以區(qū)分。如部分單位大規(guī)模購(gòu)入圖書，進(jìn)行圖書室建設(shè)。對(duì)所購(gòu)圖書就沒(méi)有記人固定資產(chǎn)核算。
三、優(yōu)化行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)管理的辦法
1、將固定資產(chǎn)購(gòu)建納入財(cái)政統(tǒng)一預(yù)算
根據(jù)構(gòu)建公共財(cái)政框架體系的總體目標(biāo)，將所有行政事業(yè)單位上級(jí)撥人或單位自籌的固定資產(chǎn)購(gòu)建資金納入財(cái)政預(yù)算管理。制定公平合理的行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)配置標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合各單位工作性質(zhì)與業(yè)務(wù)量大小進(jìn)行綜合平衡，采用公共預(yù)算方式配置資產(chǎn)。任何行政事業(yè)單位的固定資產(chǎn)購(gòu)置不論其資金來(lái)源如何，必須納入財(cái)政預(yù)算，實(shí)行政府采購(gòu)，預(yù)算經(jīng)人大審議批準(zhǔn)后非經(jīng)法定程序不得更改。
2、加大政府對(duì)行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)的監(jiān)管力度
將行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)的產(chǎn)權(quán)收歸政府所有，財(cái)政部門代表政府進(jìn)行統(tǒng)一管理、統(tǒng)一調(diào)配。財(cái)政在資產(chǎn)清查和產(chǎn)權(quán)移交的基礎(chǔ)上建立行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)大型數(shù)據(jù)庫(kù)，實(shí)現(xiàn)管理信息化，根據(jù)工作需要進(jìn)行統(tǒng)一調(diào)配，提高資產(chǎn)使用效率。對(duì)于單位“非轉(zhuǎn)經(jīng)”的固定資產(chǎn)，政府委托財(cái)政部門組建資產(chǎn)管理公司統(tǒng)一接收、統(tǒng)一管理，按照市場(chǎng)經(jīng)濟(jì)規(guī)則運(yùn)營(yíng)，經(jīng)營(yíng)收益歸政府所有。全額上繳財(cái)政。確保國(guó)有資產(chǎn)保值、增值。同時(shí)。根據(jù)國(guó)家對(duì)行政事業(yè)單位改革的要求，結(jié)合各單位實(shí)際情況，逐步采取拍賣經(jīng)營(yíng)權(quán)或產(chǎn)權(quán)的方式對(duì)“非轉(zhuǎn)經(jīng)”資產(chǎn)進(jìn)行處置，處置收益全額納入財(cái)政預(yù)算安排，真正實(shí)現(xiàn)政府退出市場(chǎng)，還利于民。
3、完善固定資產(chǎn)管理內(nèi)控制度
制度化管理是搞好固定資產(chǎn)管理的重要手段，要管好用好固定資產(chǎn)。必須做到有章可循，有章必循，違章必究。具體做好以下幾項(xiàng)工作：第一、固定資產(chǎn)預(yù)算制度。行政事業(yè)單位每年應(yīng)根據(jù)本單位實(shí)際發(fā)展需要及資金情況，合理安排屆定資產(chǎn)預(yù)算，預(yù)算批準(zhǔn)后，一般不予突破，對(duì)“緊急需求”固定資產(chǎn)的報(bào)批應(yīng)在耐度上有所規(guī)定，并從嚴(yán)掌握。第二、授權(quán)批準(zhǔn)制度。船確審批人對(duì)固定資產(chǎn)購(gòu)置的授權(quán)批準(zhǔn)方式、權(quán)限、程序和責(zé)任。審批人不得越權(quán)審批，未經(jīng)審批，不得采購(gòu)。第三、組織責(zé)任制度。對(duì)購(gòu)置、驗(yàn)收、接收、環(huán)節(jié)指定專門部門或?qū)Ｈ耍鞔_其責(zé)任、具體工作要求，并相互稽核、職權(quán)分離。第四、賬簿記錄制度。固定資產(chǎn)管理部門和會(huì)計(jì)部門要完整保存固定資產(chǎn)的請(qǐng)購(gòu)、審批文件、采購(gòu)合同、招投標(biāo)記錄，購(gòu)置發(fā)票以及驗(yàn)收?qǐng)?bào)告、保管、使用、維修、處置等各項(xiàng)會(huì)計(jì)記錄，嚴(yán)防調(diào)換、遺失和損壞，并主動(dòng)接受財(cái)政部門的監(jiān)督和檢查。第五、同定資產(chǎn)盤點(diǎn)、處置制度。固定資產(chǎn)的使用和保管部門要定期對(duì)實(shí)物進(jìn)行消盤盤點(diǎn)，做到賬實(shí)相符，防止資產(chǎn)流失。行政事業(yè)單位固定資產(chǎn)的報(bào)廢和轉(zhuǎn)讓，需經(jīng)單位負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)后核銷；單位各部門對(duì)固定資產(chǎn)進(jìn)行調(diào)配要遵循“合理配置、有效使用”的原則，并辦理內(nèi)部調(diào)撥手續(xù)，及時(shí)進(jìn)行變更登記。第六、固定資產(chǎn)維護(hù)制度。通過(guò)清查盤點(diǎn)，查明固定資產(chǎn)的使用、維護(hù)保養(yǎng)等情況是否正常，并對(duì)實(shí)物的盤虧和人為損壞進(jìn)行賠償作出具體規(guī)定。及時(shí)發(fā)現(xiàn)和堵塞管理中的漏洞，妥善處理和解決出現(xiàn)的各種問(wèn)題，保證固定資產(chǎn)的安全完整。
由于我國(guó)資本市場(chǎng)發(fā)展時(shí)間較短，國(guó)內(nèi)學(xué)術(shù)界對(duì)資本結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)和研究也相對(duì)遲緩。目前，大多數(shù)研究我國(guó)上市公司資本結(jié)構(gòu)的學(xué)者普遍認(rèn)為：我國(guó)上市公司嚴(yán)重依賴于外部籌資，內(nèi)部籌資所占比重平均最多不超過(guò)9%，且外部籌資中又以權(quán)益籌資為主（主要是股票籌資），權(quán)益籌資比重一般高達(dá)51%以上。關(guān)于資本結(jié)構(gòu)的定義有廣義與狹義之分，廣義的資本結(jié)構(gòu)是指企業(yè)資金來(lái)源中所特有的負(fù)債資本與權(quán)益資本之間的比例，狹義的資本結(jié)構(gòu)則是指企業(yè)各種長(zhǎng)期資本的比例。國(guó)外學(xué)者主要傾向于狹義的定義，這是因?yàn)椋号c負(fù)債比率、杠桿比率相比，資本結(jié)構(gòu)通常嚴(yán)格地與公司經(jīng)營(yíng)所需的永久性或長(zhǎng)期資本有關(guān)，所以，國(guó)外一般采用長(zhǎng)期負(fù)債率這一指標(biāo)來(lái)研究上市公司的資本結(jié)構(gòu)。國(guó)內(nèi)學(xué)者的研究則采用廣義的定義，所用的衡量指標(biāo)是資產(chǎn)負(fù)債率，主要研究資本結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)以及資本結(jié)構(gòu)、財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)、企業(yè)價(jià)值的關(guān)系等。
（一）醫(yī)藥行業(yè)上市公司資本結(jié)構(gòu)定量分析。
本文選取我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)中最具代表性的5家上市公司進(jìn)行分析，包括北京同仁堂、哈藥集團(tuán)、國(guó)藥股份、東阿阿膠和南京醫(yī)藥，并分別從負(fù)債與所有者權(quán)益結(jié)構(gòu)比和債務(wù)結(jié)構(gòu)這兩個(gè)角度分析我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)上市公司的資本結(jié)構(gòu)。前者采用資本負(fù)債率來(lái)衡量負(fù)債與所有者權(quán)益結(jié)構(gòu)比，后者采用銀行借款債務(wù)率來(lái)衡量債務(wù)結(jié)構(gòu)。
1.負(fù)債與所有者權(quán)益結(jié)構(gòu)比分析。
資本負(fù)債率是反映負(fù)債與所有者權(quán)益結(jié)構(gòu)比的重要指標(biāo)，該指標(biāo)值的高低能說(shuō)明企業(yè)的負(fù)債與所有者權(quán)益的比例是否合理，一般情況下，我們認(rèn)為資本負(fù)債率為1時(shí)的資本結(jié)構(gòu)是最合理的，比較成熟的企業(yè)資本負(fù)債率可達(dá)到1.5，但是不同行業(yè)對(duì)資本負(fù)債率的要求也不同。從表1可以看出，2010-2012年5家上市公司中，資本負(fù)債率低于1的有3家，分別是北京同仁堂、哈藥股份和東阿阿膠，資本負(fù)債率高于1的有2家，分別是國(guó)藥股份和南京醫(yī)藥。其中，資本負(fù)債率最低的是東阿阿膠，資本負(fù)債率最高的是南京醫(yī)藥。由此可見(jiàn)，很多醫(yī)藥行業(yè)的上市公司仍然以穩(wěn)健型的資本結(jié)構(gòu)為主，認(rèn)為權(quán)益融資具有永久性，無(wú)固定到期日，也無(wú)償還的上下限，還可以減少利息的支出，從而提高企業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益，而債務(wù)資本利息確定，到期還本付息，給企業(yè)帶來(lái)財(cái)務(wù)負(fù)擔(dān)和經(jīng)營(yíng)風(fēng)險(xiǎn)。因此，在籌集資金時(shí)，大多數(shù)上市公司視權(quán)益融資為首要選擇，對(duì)于負(fù)債過(guò)于謹(jǐn)慎，表現(xiàn)為上市后極力擴(kuò)大股票發(fā)行額度，而且分配方案也多以配股為主，很少支付現(xiàn)金股利。
2.債務(wù)結(jié)構(gòu)分析。
企業(yè)債務(wù)包括銀行借款債務(wù)、企業(yè)債券、融資租賃、商業(yè)信用等。一般情況下，企業(yè)取得銀行借款的限制條件較多，比如規(guī)定企業(yè)的資金用途，要求到期償還本金支付利息，企業(yè)若不能及時(shí)償還，便會(huì)陷入財(cái)務(wù)危機(jī)。2010-2012年5家上市公司的債務(wù)結(jié)構(gòu)中，北京同仁堂和南京醫(yī)藥的銀行借款債務(wù)所占比重較大。其中，南京醫(yī)藥的銀行借款債務(wù)率最高，三年來(lái)均超過(guò)30%；變化比較明顯的有北京同仁堂和國(guó)藥股份，北京同仁堂的銀行借款債務(wù)率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，這主要是由于該公司近年來(lái)考慮采用企業(yè)債券籌資所致，而國(guó)藥股份在2010年和2011年均未涉及銀行借款業(yè)務(wù)，直至2012年開始采用銀行借款方式籌資。
（二）醫(yī)藥行業(yè)上市公司呈現(xiàn)的資本結(jié)構(gòu)特征。
綜上所述，我國(guó)醫(yī)藥行業(yè)上市公司的資本結(jié)構(gòu)表現(xiàn)為以下特征：一是資本負(fù)債率較低，從計(jì)算結(jié)果可以看出，除南京醫(yī)藥外的4家上市公司的平均資本負(fù)債率為0.75左右；二是負(fù)債結(jié)構(gòu)不合理，很多企業(yè)的流動(dòng)負(fù)債所占比重較高；三是長(zhǎng)期融資中更傾向于股權(quán)融資。我國(guó)的資本市場(chǎng)尚處于成長(zhǎng)階段，市場(chǎng)秩序和金融監(jiān)管方面還需要進(jìn)一步完善，不合理的資本結(jié)構(gòu)必然會(huì)引起一系列的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)，這對(duì)企業(yè)的發(fā)展是十分不利的。筆者認(rèn)為，我國(guó)企業(yè)債券市場(chǎng)相對(duì)落后，企業(yè)債券發(fā)行的審核方式還停留在行政審批制，企業(yè)債券利率與銀行利率掛鉤，企業(yè)債券無(wú)法根據(jù)市場(chǎng)需求來(lái)確定利率，這大大降低了企業(yè)債券市場(chǎng)的籌資效率。而股票市場(chǎng)的投機(jī)者較多，使上市公司的管理缺少有效的監(jiān)督機(jī)制。
二、醫(yī)藥行業(yè)上市公司資本結(jié)構(gòu)對(duì)財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)的影響分析
衡量資本結(jié)構(gòu)對(duì)財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)的影響程度可以通過(guò)計(jì)算財(cái)務(wù)杠桿系數(shù)來(lái)分析，財(cái)務(wù)杠桿系數(shù)（DFL）是用來(lái)反映企業(yè)稅后利潤(rùn)的變動(dòng)率相當(dāng)于息稅前利潤(rùn)變動(dòng)率的倍數(shù)。具體計(jì)算公式為：DFL=稅后利潤(rùn)變動(dòng)率/息稅前利潤(rùn)變動(dòng)率=息稅前利潤(rùn)/（息稅前利潤(rùn)-年利息）由上述公式所計(jì)算的財(cái)務(wù)杠桿系數(shù)較大時(shí)，說(shuō)明企業(yè)的財(cái)務(wù)杠桿效應(yīng)和財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)越高；當(dāng)財(cái)務(wù)杠桿系數(shù)較小時(shí)，說(shuō)明企業(yè)的財(cái)務(wù)杠桿效應(yīng)和財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)越低。下面以5家上市公司2010年和2012年的平均資本負(fù)債率為例分析醫(yī)藥行業(yè)上市公司資本結(jié)構(gòu)對(duì)財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)的影響。假設(shè)某公司的銷售收入為135000萬(wàn)元，固定成本21600萬(wàn)元，變動(dòng)成本102000萬(wàn)元，息稅前利潤(rùn)11400萬(wàn)元，非流動(dòng)資產(chǎn)135700萬(wàn)元，債務(wù)年利率8%，公司所得稅稅率25%。1.2010年平均資本負(fù)債率為1.7時(shí)，資產(chǎn)負(fù)債率約為63%。DFL=11400/（11400-135700×63%×8%）=2.5當(dāng)息稅前利潤(rùn)增長(zhǎng)1倍時(shí)，普通股每股稅后利潤(rùn)將增長(zhǎng)2.5倍，這就表現(xiàn)為財(cái)務(wù)杠桿效應(yīng)，當(dāng)息稅前利潤(rùn)下降1倍時(shí)，普通股每股稅后利潤(rùn)將下降2.5倍，這就表現(xiàn)為財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。2.2012年平均資本負(fù)債率為1.8時(shí)，資產(chǎn)負(fù)債率約為64%（其他因素不變）。DFL=11400/（11400-135700×64%×8%）=2.56當(dāng)息稅前利潤(rùn)增長(zhǎng)1倍時(shí)，普通股每股稅后利潤(rùn)將增長(zhǎng)2.56倍；反之，則降低2.56倍。由此可見(jiàn)，資本結(jié)構(gòu)的變化將引起財(cái)務(wù)杠桿效應(yīng)的變化，隨之產(chǎn)生一定的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。從上述計(jì)算過(guò)程可以看出：醫(yī)藥行業(yè)上市公司的平均資本負(fù)債率變動(dòng)0.1個(gè)單位時(shí)，財(cái)務(wù)杠桿系數(shù)就會(huì)變動(dòng)0.06個(gè)單位，也就是說(shuō)產(chǎn)生財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)的概率變大了，因此企業(yè)應(yīng)該通過(guò)優(yōu)化資本結(jié)構(gòu)，以更好地規(guī)避即將產(chǎn)生的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。
三、優(yōu)化醫(yī)藥行業(yè)上市公司資本結(jié)構(gòu)，控制財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)的對(duì)策建議
（一）對(duì)公司的資本結(jié)構(gòu)實(shí)施戰(zhàn)略化管理。
醫(yī)藥行業(yè)上市公司應(yīng)對(duì)資本結(jié)構(gòu)實(shí)施戰(zhàn)略管理，以增強(qiáng)自身的競(jìng)爭(zhēng)力。為提高企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力，保證有充足的資金投入，需要對(duì)企業(yè)資本構(gòu)成的發(fā)展方向進(jìn)行全局性、長(zhǎng)期性和創(chuàng)造性的謀劃。對(duì)資本結(jié)構(gòu)的戰(zhàn)略化管理可以幫助公司制定長(zhǎng)遠(yuǎn)的發(fā)展戰(zhàn)略，支持公司的良性運(yùn)行及穩(wěn)定發(fā)展。
（二）對(duì)資本結(jié)構(gòu)進(jìn)行合理設(shè)計(jì)以實(shí)現(xiàn)成本與收益的平衡。
政府可以通過(guò)大力發(fā)展企業(yè)債券市場(chǎng)，鼓勵(lì)醫(yī)藥行業(yè)上市公司進(jìn)行債權(quán)融資。一方面可以健全公司債券的發(fā)展，為投資者提供一種較好的投資方式；另一方面使公司的資本結(jié)構(gòu)趨于合理，有利于投資者的長(zhǎng)遠(yuǎn)利益和資本市場(chǎng)的穩(wěn)定發(fā)展。另外，上市公司應(yīng)結(jié)合自身情況充分考慮負(fù)債的利息抵稅效應(yīng)和財(cái)務(wù)杠桿效應(yīng)，合理安排債務(wù)結(jié)構(gòu)和融資次序，從而最大限度地降低資金成本和財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)。
（三）對(duì)財(cái)務(wù)人員加強(qiáng)意識(shí)教育，樹立風(fēng)險(xiǎn)管理觀念。
上市公司需要對(duì)企業(yè)的所有財(cái)務(wù)人員進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)防范意識(shí)的教育，樹立正確的風(fēng)險(xiǎn)管理觀念。為了有效防范可能發(fā)生的財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)，企業(yè)必須從長(zhǎng)遠(yuǎn)利益著眼，建立和健全企業(yè)財(cái)務(wù)風(fēng)險(xiǎn)防御機(jī)制。
四、結(jié)語(yǔ)
1月末，又有一只醫(yī)藥行業(yè)基金進(jìn)入市場(chǎng)――自1月30日日至2月24日，華寶興業(yè)醫(yī)藥生物優(yōu)選股票型基金正式發(fā)行。
該基金股票投資比例為基金資產(chǎn)的60%-95%，其中投資于醫(yī)藥生物相關(guān)股票的比例不低于股票資產(chǎn)的80%，包含化學(xué)原料藥、化學(xué)藥制劑、中藥飲片、中藥制劑、醫(yī)療器械、醫(yī)藥商業(yè)、醫(yī)療服務(wù)、生物制藥和生物農(nóng)業(yè)等。
據(jù)華寶興業(yè)基金介紹，選在龍年之始推出醫(yī)藥生物基金，一方面是瞄準(zhǔn)了該行業(yè)“黃金十年”的成長(zhǎng)機(jī)遇；另一方面市場(chǎng)經(jīng)歷前期大跌后，目前醫(yī)藥行業(yè)估值僅19倍，處于歷史最低位，一些前期預(yù)期過(guò)高的小股票正在去泡沫，許多個(gè)股的投資價(jià)值已非常顯著。
在各種行業(yè)基金中，醫(yī)療藥品作為市場(chǎng)關(guān)注的焦點(diǎn)板塊，其行業(yè)基金也得到了較快的發(fā)展，已初具規(guī)模。投資于醫(yī)藥行業(yè)基金無(wú)需對(duì)特定的醫(yī)藥產(chǎn)品有非常深入的專業(yè)知識(shí)，還可以使得個(gè)股風(fēng)險(xiǎn)在行業(yè)內(nèi)部得到充分的分散，在收益水平較為穩(wěn)定的基礎(chǔ)上還能分享新藥開發(fā)帶來(lái)的部分成長(zhǎng)收益。
醫(yī)藥類基金現(xiàn)身晚
好買基金研究員劉天天分析指出，雖然醫(yī)藥行業(yè)是大部分偏股型基金重倉(cāng)配置的行業(yè)之一，但集中投資于此的行業(yè)基金數(shù)量并不是很多，在目前開放式基金名稱中帶有“醫(yī)”或“藥”字樣的基金中，共有2支開放式股票型基金：易方達(dá)醫(yī)療保健（110023）和匯添富醫(yī)藥保?。?70006）。兩只基金分別成立于2011年1月28日和2010年9月21日。此外，在私募基金中也有從容旗下的幾只醫(yī)療類基金集中于醫(yī)藥行業(yè)。
由于國(guó)內(nèi)的醫(yī)藥類上市公司成立時(shí)間較晚，資產(chǎn)規(guī)模也相對(duì)較小，導(dǎo)致其主營(yíng)業(yè)務(wù)集中程度較高，行業(yè)代表性較強(qiáng)。在行業(yè)指數(shù)逐步成熟的同時(shí)，專門投資于該行業(yè)的行業(yè)基金也初步形成。
易方達(dá)醫(yī)療保健和匯添富醫(yī)藥保健的成立時(shí)間相對(duì)較晚，但行業(yè)特征都比較突出，契約中對(duì)于投資方向的定義都有明確定義，二者都看好未來(lái)中國(guó)醫(yī)藥保健行業(yè)未來(lái)的發(fā)展，希望通過(guò)投資具有較強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的公司來(lái)獲得中長(zhǎng)期的收益。與其他行業(yè)基金相比，其投資范圍定義比較嚴(yán)謹(jǐn)，使其結(jié)果與大盤表現(xiàn)間的差異性較大，從而造成行業(yè)特征比較清晰。
商品類基金投資范圍
基金名稱 投資方向
易方達(dá)醫(yī)療保健 本基金通過(guò)投資具有較強(qiáng)競(jìng)爭(zhēng)優(yōu)勢(shì)的醫(yī)療保健行業(yè)上市公司，把握中國(guó)醫(yī)療保健行業(yè)發(fā)展中的投資機(jī)會(huì)，力爭(zhēng)實(shí)現(xiàn)基金資產(chǎn)的長(zhǎng)期穩(wěn)健增值。投資于上海申銀萬(wàn)國(guó)證券研究所有限公司界定的醫(yī)藥生物行業(yè)股票的比例不低于股票資產(chǎn)的85%。
匯添富醫(yī)藥保健 隨著中國(guó)經(jīng)濟(jì)的持續(xù)增長(zhǎng)和中國(guó)醫(yī)療衛(wèi)生保障體系的不斷完善，人們?cè)卺t(yī)藥保健方面的投入將不斷增加，醫(yī)藥保健行業(yè)將長(zhǎng)期受益。本基金發(fā)掘相應(yīng)上市公司中所蘊(yùn)含的投資機(jī)會(huì)，通過(guò)主動(dòng)的投資組合管理以努力獲取中長(zhǎng)期超額收益。本基金以醫(yī)藥保健行業(yè)上市公司為股票主要投資對(duì)象，投資于醫(yī)藥保健行業(yè)上市公司股票的資產(chǎn)占股票資產(chǎn)的比例不低于80％。
數(shù)據(jù)來(lái)源：好買基金研究中心
此外，兩只基金業(yè)績(jī)的比較標(biāo)準(zhǔn)都是基于專門的醫(yī)藥生物指數(shù)，而并非像其他股票型基金一樣單純的與滬深綜合指數(shù)相比。
從行業(yè)特點(diǎn)上來(lái)看，上述兩個(gè)醫(yī)藥指數(shù)的市盈率和市凈率都要大幅高于大盤指數(shù)，而指數(shù)的年均漲幅也遠(yuǎn)超滬深300指數(shù)，符合成長(zhǎng)性行業(yè)的特征。同時(shí)，醫(yī)藥指數(shù)受到物價(jià)變化的影響要弱于整體市場(chǎng)，又體現(xiàn)了該行業(yè)的防御性。
公私募醫(yī)藥基金旗鼓相當(dāng)
研究易方達(dá)醫(yī)療保健基金可以發(fā)現(xiàn)，其成立以來(lái)持倉(cāng)的平均行業(yè)分布情況來(lái)看，其持股相對(duì)集中，所涉及行業(yè)較少，有超過(guò)8成的資金都配置在醫(yī)藥生物行業(yè)，其他占比較高的行業(yè)還有批發(fā)零售和機(jī)械設(shè)備?；鸪闪⒁詠?lái)的配置逐步向輕工業(yè)和服務(wù)業(yè)漂移，其2011年上半年曾少量持有的石化行業(yè)在下半年被社會(huì)服務(wù)和食品飲料兩個(gè)行業(yè)所替代，而基金在機(jī)械設(shè)備行業(yè)上的配置有上升趨勢(shì)，該行業(yè)的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)對(duì)基金凈值產(chǎn)生較大的影響。
易方達(dá)醫(yī)療保健的主動(dòng)管理并未明顯增加其收益的波動(dòng)性。基金在歷史上戰(zhàn)勝滬深300指數(shù)的概率為47.06%，略低于5成。易方達(dá)醫(yī)療保健目前的收益主要來(lái)源于市場(chǎng)的整體變動(dòng)，在選股擇時(shí)方面尚未表現(xiàn)出很明顯的優(yōu)勢(shì)。
而針對(duì)匯添富醫(yī)藥保健基金，根據(jù)基金2011年來(lái)持倉(cāng)的平均行業(yè)分布情況，除了將85%左右的股票倉(cāng)位配置在醫(yī)藥生物行業(yè)外，匯添富醫(yī)藥保健在機(jī)械設(shè)備和批發(fā)零售這兩個(gè)行業(yè)上也集中了相對(duì)較多的資金。與易方達(dá)醫(yī)藥保健不同的是它還配置了一部分石油化工和信息技術(shù)行業(yè)的個(gè)股。從4個(gè)季度的變化來(lái)看，醫(yī)藥生物行業(yè)的配比不斷上升，行業(yè)集中度提高，此外基金還一直在增配批發(fā)零售業(yè)，該行業(yè)在下半年已成為除醫(yī)藥生物外持倉(cāng)比例最高的行業(yè)。
數(shù)據(jù)顯示出匯添富醫(yī)藥保健的年化超額收益較低，僅為3.69%，戰(zhàn)勝基準(zhǔn)的比例稍高，約為50.98%。此外，其年化波動(dòng)率指標(biāo)則超過(guò)了同期基準(zhǔn)，年化標(biāo)準(zhǔn)差達(dá)到20.73%，約為比較基準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)差的1.11倍，基金凈值的波動(dòng)性較大一方面與其配置相對(duì)集中有關(guān)，另一方面可能也源于其股票倉(cāng)位較高。
2011年以來(lái)，匯添富醫(yī)藥保健基金在選股方面表現(xiàn)欠佳，但是卻具有顯著的擇時(shí)能力，在一定程度支撐了基金的業(yè)績(jī)。與易方達(dá)醫(yī)療保健相比，其受到滬深300指數(shù)的影響并不顯著，可能有以下原因：該基金成立時(shí)間較長(zhǎng)，在投資上主動(dòng)性更強(qiáng)；醫(yī)藥指數(shù)在下半年與大盤指數(shù)的相關(guān)性顯著提高，
醫(yī)藥行業(yè)除了得到公募基金的青睞外，也吸引了眾多私募基金的關(guān)注，目前在私募領(lǐng)域也有一些專門投資于該行業(yè)的基金，其中比較有特色的是從容旗下的從容醫(yī)療、從容醫(yī)療2期、從容內(nèi)需醫(yī)療3期、從容醫(yī)療5期、從容醫(yī)療精選和從容醫(yī)療7期六只。其成立的時(shí)間與前兩只公募行業(yè)基金相當(dāng)，從2011年前成立的從容醫(yī)療和從容醫(yī)療2期來(lái)看，這兩只私募基金選股擇時(shí)能力并不顯著，主要的差異仍然是來(lái)自于大盤收益的變化。總體來(lái)說(shuō)和兩只公募醫(yī)藥類基金的表現(xiàn)相當(dāng)。
國(guó)內(nèi)基金市場(chǎng)發(fā)展速度很快，行業(yè)基金不斷涌現(xiàn)并迅速成熟，較晚出現(xiàn)的醫(yī)藥行業(yè)基金已經(jīng)在很大程度上改善了商品類基金行業(yè)特征表現(xiàn)不足的弊端，從基金契約和比較基準(zhǔn)設(shè)立都反映了該行業(yè)的特點(diǎn)，醫(yī)藥行業(yè)基金的防御性和成長(zhǎng)性有著較好的表現(xiàn)。當(dāng)前公私募醫(yī)藥基金目前差異不大，收益率水平相當(dāng)，未來(lái)還有比較廣闊的提升空間。
對(duì)于資產(chǎn)配置來(lái)說(shuō)，在對(duì)經(jīng)濟(jì)周期有比較確定判斷的基礎(chǔ)上，投資者可以在滯脹期增配醫(yī)藥類基金，而在復(fù)蘇期減配該類基金，而在過(guò)熱和衰退期的話，還需要結(jié)合該行業(yè)基金投資個(gè)股的成長(zhǎng)性等因素進(jìn)行更深入的分析。
